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猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量测定(SPE-LC/MS/MS)

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一.实验目的

本文使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的Cleanert® PEP-2固相萃取柱、Venusil® MP C18色谱柱和Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪,遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定(GB/T 20752-2006)》提供的方法,检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。

 

二.实验方法

2.1.样品信息

2.2.样品称取和脱脂
称取猪肉样品2g(精确到0.01g),置于50m棕色离心管中,加入15ml甲醇-水混合溶液(v:v=21),均质1min,再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤刀头,二者合并8000r/min离心5min,吸取上清液倒掉。
注:为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响,可加入同位素内标,采用内标法定量检测。
2.3.水解和衍生(注意避光)
向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液,涡旋1min使之混合均匀,之后加入0.3ml浓度为0.05mol/L2-硝基苯甲醛,混匀,于37℃温水中避光衍生16小时。
2.4.净化处理
将衍生后的样品冷却至室温,加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾,并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4,混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱(规格为60mg/3ml,用5ml甲醇、5ml水活化),并用10ml的水洗涤固相萃取小柱,然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中(此过程可在Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪上完成,仪器方法见附录B。洗脱液于40℃下氮气吹干。
用样品定容溶液(10ml乙腈,0.3ml的乙酸用水稀释至100ml)定容至1ml,充分溶解,并用0.22µm滤膜过滤。
2.5.检测方法
色谱柱:Venusil® MP C182.1×150mm5µm100Å
质谱仪:API 4000+
流动相:A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液
表1 梯度洗脱条件
时间(min
A%
B%
0
80
20
1
80
20
3
50
50
7
25
75
7.1
5
95
10
5
95
10.1
80
20
16
80
20
流速:0.2mL/min
进样体积:5μL
离子源:电喷雾(ESI),正离子模式
扫描方式:多反应监测(MRM
 
质谱仪离子源参数
Source/Gas
Collision Gas(CAD)
6
Curtain Gas(CUR)
15
Ion Source Gas 1(GS 1)
50
Ion Source Gas 2(GS 2)
50
Ion Spray Voltage(IS)
5500
Temperature(TEM)
600
Interface Heater(ihe)
On
 
3 4种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表
物质名称
保留时间(min)
监测离子对
DP
EP
CE
CXP
SEM
8.10
209.1/166.1
51
10
17
10
209.1/192.1
51
10
17
10
AHD
8.30
249.2/134.1
61
10
20
10
249.2/104.1
66
10
31
10
AOZ
8.89
236.2/134.1
61
10
20
10
236.2/104.1
56
10
31
10
AMOZ
3.12
335.3/291.2
46
10
19
10
335.5/128.1
46
10
19
10
 

 

三.实验结果

0.5ppb猪肉基质加标回收实验结果:
 
猪肉中0.5ppb加标回收实验结果
名称
1(%)
2(%)
3(%)
平均回收率(%)
RSD(%)
109.43
97.84
109.75
105.67
6.42
SEM
91.81
88.91
88.22
89.65
2.12
AHD
80.68
82.11
77.25
80.01
3.12
AOZ
83.94
80.70
80.85
81.83
0.02

 

四、实验结论

Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计,用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作,全净化过程可在避光条件下进行,保证检测结果的准确性和重现性。Cleanert® PEP-2固相萃取柱和Venusil® MP C18色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求,结果准确可靠,重现性好。

 

五、订货信息

实验仪器及耗材
产品名称
规格
订货信息
Qdaura 卓睿™全自动固相萃取
4通道24
SPE-40
Cleanert® PEP-2固相萃取柱
60mg/3ml50/
PE0603-2
Venusil® MP C18液相色谱柱
2.1×150mm5µm100Å
VA951502-0

 

附录A

 

1 4种硝基呋喃代谢物总离子图

 

2 SEM209/166)质谱图

 

3 AOZ236/134)质谱图

 

4 AHD249/134)质谱图

 

5 AMOZ335/291)质谱图

 
附录B

 

卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年02月17日