JJF 1817-2020 核酸分析仪校准规范

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标准编号:JJF 1817-2020
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标准类别:其他标准
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JJF 1817-2020 标准规范下载简介:

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JJF 1817-2020 核酸分析仪校准规范

校准前将低温保存的标准物质及配套试剂提前拿出冰箱,平衡30min后按照 附录A配制及使用标准溶液。打开仪器,预热10min

LIE18172020

若校准板为3×4孔的芯片模式,按照表1所示准备校准板,若校准板为12联排管 模式,按照表2所示准备校准板,其他模式的校准板可参照表1和表2准备,空白 用一级水代替标准溶液。

JB/T 11314-2013 家用潜水泵用罩极式电动机技术条件表1校准板为芯片模式时的加样排布

表2校准板为12联排管模时的加样排布

表2校准板为12联排管模式的加样排布

注:片断长度棕准品为配套试剂盒内的长度棕准品。

7.1.2片段长度示值误差

参照仪器说明书,将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录10次片段 长度测定值,按公式(1)计算片段长度示值误差。

式中: ACbp一片段长度示值误差,bp; Cp 一片段长度测量的算术平均值(保留整数),bp: Chn 片段长度标准值,bp。

7.1.3片段浓度示值误差

参照仪器说明书,将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录10次片段

浓度测定值,按公式(2)计算片段浓度示值误差。

LIE18172020

参照7.1.1的加样方式,重复测量10次标准溶液的片段长度和片段浓度,按么 式(3)分别计算相对实验标准偏差,作为片段长度重复性和片段浓度重复性。

式中: RSD一相对实验标准偏差,%; X,—第i次DNA标准物质的片段浓度或片段长度测得值,ng/uL或bp: xn次片段浓度或片段长度测得值的算术平均值,ng/uL或bp: 测量次数。

参照试剂盒说明书,用移液器将配制好的o.1ng/μL、1ng/uL、4ng/uL、10 ng/μL、40ng/μuL的DNA片段浓度线性标准溶液加入到校准板中,每个浓度加样2 次,按表1或表2所示排布准备校准板,其他模式的校准板可参照表1和表2准备 空白用一级水代替标准溶液。

7.3.2片段浓度线性

参照仪器说明书,将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。每个浓度的线 性标准溶液进行2次重复测量,取其浓度的算术平均值,根据标准溶液的浓度标 准值为横坐标和测得的浓度平均值为纵坐标进行线性回归,按公式(4)计算线 性相关系数。

式中: 线性相关系数; C,——第i种线性标准溶液的浓度测量值,ng/uL; c——线性标准溶液的浓度测量值的算术平均值,ng/uL; Csi——第i种线性标准溶液的浓度标准值,ng/uL; c线性标准溶液的浓度标准值的算术平均值,ng/uL;

JIF18172020

按本规范进行校准,原始记录格式参考附录B,不确定度评定参照附录D, 校准结果在校准证书上反映,校准证书应符合JJF1071一2010中5.12的要求, 参照附录C给出校准项目名称、测量值以及扩展不确定度。

根据实际使用情况,送校单位可根据实际使用情况自主决定复校时间间隔, 建议不超过1年。

LIE18172020

校准用试剂和溶液配制及使用方法

标准溶液应现配现用。 A.7.1示值误差和重复性校准用标准溶液:用E缓冲液将DNA片段标准物质稀 释为2ng/uL的标准溶液。 A.7.2线性校准用标准溶液:用TE缓冲液将DNA片段标准物质分别稀释为0.1 ng/μL、1ng/μL、4ng/μL、10ng/L、40ng/μL的系列标准溶液。

溶液上样量按照被校仪器说明书执行。 以12联排管或8联排管模式进样的分析仪,上样量一般为15u。以12孔 芯片模式进样的分析仪,每孔上样量一般为1L。

JIF18172020附录B校准原始记录参考格式送检单位:校准日期:年仪器名称:制造厂:型号:出厂编号:证书编号:环境温度:℃相对湿度:%气压:kPaB.1片段长度示值误差和片段长度重复性校准记录标准值Cbp测量值的平均值相对标准偏差标准物质片段长度测量值bpCp/bpRSD名称bpB.2浓度示值误差和浓度重复性校准记录标准值Ccon测量值的平均值相对标准偏差标准物质ng/uL浓度测量值ng/uLCcon / (ng/μL)RSD名称B.3线性序号S1S2S3S4S5标准值/(ng/μL)测量值/(ng/μL)相关系数Y校准员:核验员:

LIF18172020

表C.1校准项目和校准结果

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浓度示值误差的不确定度评定示例

采用分析仪直接测定DNA片段含量标准物质,并与标准物质的标称值进行 比较。

D.3合成标准不确定度计算公式

根据测量模型,且输入量Co和Ceos之间不相关,所以测量结果的 合成标准不确定度的计算公式为:

不确定度来源包括: b)片段含量标准物质引入的标准不确定度uccons 测量重复性和标准物质引入的不确定度不相关,所以合成标准不确定度根据 公式D.2进行计算。 下面以一次分析仪校准为例,具体分析其测量不确定度。在校准中对200bp 含量的标准物质测定,结果分别为2.51ng/uL、2.76ng/uL、2.65ng/uL、2.65ng/uL、 2.57ng/uL、2.51ng/uL、2.74ng/uL、2.69ng/uL、2.54ng/μL、2.78ng/uL:该片

LIF18172020

段长度标准物质稀释后的标准物质稀释液的含量标准值为2.85ng/uL+0.08ng/uL (k=2) 。

D.5棕准不确定度一览表

在校准中DNA含量测定结果的值分别为2.51ng/uL、2.76ng/uL、2.65ng/uL、 2.65ng/μL.2.57ng/uL、2.51ng/μuL.2.74ng/uL.2.69ng/uL.2.54ng/μL、2.78ng/uL; 单次测量的实验标准偏差s(x):

则测量结果平均值的标准不确定度为

=s(x)/Vn=0.103//10=0.033ng//L 标准物质引入的标准不确定度u

D.6.2标准物质引入的标准不确定度uc

进行含量校准时使用的是标准生质稀释液,该标准物质稀释液引入的不确定 度uccons包含了未稀释的标准物质的不确定度ucrc和稀释过程引入的不确定度, 和包含因子k,根据公式(D.3)计算:

Ucyc一 标准物质引入的标准不确定度: 标准物质证书提供的包含因子,通常为2。 200bp标准物质稀释前的含量标准值为199.4ng/μL±5.26ng/μuL(k=2),则 由标准物质引入的标准不确定度:

LIF18172020

采用天平称量稀释,稀释过程引入的不确定度即天平称量的不确定度包括天 平偏载误差、天平称量重复性、示值误差,合成后由天平称量稀释引入的相对标 准不确定度为0.0028。则稀释后的工作标准物质的相对不确定度为:

希释后的标准物质的标准不确 定度为: 由式(D.2)可得:

希释后的标准物质的标准不确

DB34T 1998-2013 饲料中五种喹诺酮类药物的测定 液相色谱-串联质谱法取包含因子k=2.则

表D.1芯片电泳仪元值误差测量的标准不确定度一览表

JIF18172020

采用天平称量稀释,稀释过程引入的不确定度即天平称量的不确定度包括天 平偏载误差、天平称量重复性、示值误差,合成后由天平称量稀释引入的相对标 准不确定度为0.0028。则稀释后的工作标准物质的相对不确定度为:

希释后的标准物质的标准不确 定度为: 由式(D.2)可得:

希释后的标准物质的标准不确

取包含因子 k=2. 则

u.=ucm+u.cam=0.033+0.039=0.051ng/μl

GB 13456-2012 钢铁工业水污染物排放标准D.1芯片电泳仪无值误差测量的标准不确定度一

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