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GBT 39303-2020 废水处理系统微生物样品前处理通用技术规范.pdf50mL离心管中，于1℃～5℃保存
3.2用于宏基因组DNA提取的活性污泥样品处
7.3.2.1将采集的泥水混合物静置5min～15min至泥水产生明显分层，弃去上层清液，将下层活性污 泥装人50mL离心管中，于一20℃保存。 7.3.2.2若现场无法进行一20℃保存，可在装有活性污泥的离心管中加人等体积的无水乙醇进行固定 后于1℃~5℃保存。
HG/T 4297-2012 气体标准物质报告7.4生物膜样品的现场处理
7.4.1用于镜检或菌种分离的生物膜样品处理
1.1用铲子或力片等工具将生物膜从反应器内的填料（主要见于移动床生物膜反应器工艺、生物 化工艺、生物滤池工艺等）、生物转盘（主要见于生物转盘工艺）或滤膜（主要见于膜生物反应器 表面刮下，装入50mL离心管中，于1℃～5℃保存。 1.2对于难以刮取的填料附着型生物膜样品，直接采集其附着的部分填料装人聚丙烯采样瓶中（ 规格可视填料尺寸面定）.于1℃～5℃保存
7.4.2用于宏基因组DNA提取的生物膜样品处理
7.4.2.1用铲子或刀片等工具将生物膜从反应器内的填料、生物转盘或滤膜表面刮下，装人50mL离 心管中，于一20℃保存。 7.4.2.2对于难以刮取的填料附着型生物膜样品，直接采集其附着的部分填料装人聚丙烯采样瓶中（采 样瓶规格可视填料尺寸而定），于一20℃保存。 7.4.2.3若现场无法进行一20℃保存，可在装有生物膜的离心管或装有填料的采样瓶中加人50%乙醇 溶液，将生物膜或填料浸没、固定，于1℃～5℃保存
将采样时间、地点、样品类型 样方式、处理方式、样品体积、保存方式等参数记录于废 水处理系统微生物样品现场处理记录表
8.2微生物的分离培养
2.1分离培养样品前处理
心管中，加入20mL生理盐水使其浸没，在涡旋仪上振荡1min制成菌悬液，除去滤膜，取10mL菌悬 液待用。 3.2.1.2活性污泥的前处理：取1mL经7.3.1处理而得的活性污泥，用生理盐水稀释到10mL，在涡旋 仪上振荡30s使其混勾后待用。 3.2.1.3生物膜的前处理：对于从填料或生物转盘上刮下的生物膜，取1mL经7.4.1.1处理而得的生物 膜，用生理盐水稀释到10mL，在涡旋仪上振荡30s使其混勾后待用。对于附着于填料上的生物膜，取 0g经7.4.1.2处理而得的填料放入三角瓶中（三角瓶体积视填料尺寸而定），加人生理盐水使其浸没， 在250r/min的振荡培养箱振荡2min制成菌悬液，取10mL菌悬液待用
按照SN/T2632操作
将所分离的菌株来源、种属、培养条件、保存方式等相关参数记录于废水处理系统微生物 记录表（参见表A.2）。
9微生物样品宏基因组DNA提取与保存
9.2宏基因组DNA提取样品前处理
2.1含菌滤膜前处理：取经7.2.2处理而得的含菌滤膜二至四张，在超净工作台用灭菌剪刀将含酉 剪成碎片，浸泡于装有生理盐水的50mL离心管中，充分振荡制成菌悬液，除去滤膜，菌悬沼 000r/min离心分离10min后弃去上层清液，沉淀用于宏基因组DNA提取 2.2活性污泥前处理：将经7.3.2处理的活性污泥于8000r/min下离心分离2min，弃去上层清
沉淀用于宏基因组DNA提取。 9.2.3生物膜前处理：对于从填料或生物转盘上刮下的生物膜，若经过固定，则将混合物于8000r/min 下离心分离10min，弃去上层清液，沉淀用于宏基因组DNA提取，未经固定的生物膜可直接用于宏基 因组DNA提取；对于填料附着型生物膜，将填料浸泡于装有生理盐水的三角瓶中，振荡制成菌悬液，于 3000r/min下离心分离10min后弃去上层清液，沉淀用于宏基因组DNA提取
9.3宏基因组DNA提取
9.4.1水样按7.2.2或9.2.1处理后，将含菌滤膜或沉淀于一20℃或一80℃保存。 9.4.2活性污泥和生物膜样品分别按9.2.2和9.2.3处理后，于一20℃或一80℃保存。 9.4.3DNA样品保存前应分装多份，于一20℃或一80℃保存，避免反复冻融。
GB/T 14095-2007 农产品干燥技术 术语将所提取的微生物样品种类、DNA浓度、纯度、保存方式等相关参数记录于废水处理系统微生物样 品宏基因组DNA记录表（参见表A.3）
取的微生物样品种类、DNA浓度、纯度、保存方式等相关参数记录于废水处理系统微生物样 且DNA记录表（参见表A.3）
GB/T39303—2020附录A（资料性附录）废水处理系统微生物样品前处理记录表表A.1～表A.3给出了废水处理系统微生物样品现场处理、菌种分离、宏基因组DNA提取记录表格式。表A.1废水处理系统微生物样品现场处理记录表第页共页时间：地点：废水处理厂名称：工艺类型：样品编号采样位点样品类型采样方式样品体积处理方式保存方式备注采样人记录人校对人表A.2废水处理系统微生物分离鉴定记录表第页共页样品编号菌株编号菌株种属菌株来源培养基培养温度分离日期保存方式备注操作人校对人
GB/T39303—2020
废水处理系统微生物样品宏基因组DNA提取记
GB/T393032020
GB/T 38045-2019 船用水液压轴向柱塞泵1］GB/T30744—2014深海微生物样品前处理技术规范