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LC-MS/MS要领检测水产物中孔雀石绿和隐形孔雀石绿

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1. 适用范围

适用于水产品(鱼、蟹、虾、甲鱼等)中孔雀石绿和隐形孔雀石绿的检测。
 

2. 提取

称取相当于原始样品5 g样品(精确至0.01g)制备好的试样,置于50mL塑料具塞离心管中,加入10µL 1μg/mL的混合内标标准溶液,依次加入1 mL 0.25 g/mL盐酸羟胺溶液、2 mL 1.0 mol/mL对甲苯磺酸溶液、2 mL 0.1 mol/L pH=4.5乙酸铵缓冲溶液,摇匀后,加入30mL乙腈,剧烈振摇2min,离心5 min(4000r/min)。将上清液转移到250mL分液漏斗中,用30mL乙腈重复提取残渣一次,合并上清液。于分液漏斗中加入50mL二氯甲烷,30 mL水,振摇2分钟,静置分层,收集下层有机层于250mL旋蒸瓶中。45 ℃旋转蒸发近干。
在旋蒸残渣中加入5mL 乙腈,漩涡振荡器,溶解残渣,待净化。
 
 

3. 净化

活化/平衡:将Welchrom® PRS 500mg/3mL (P/N:WSS46PR0305)(上海月旭提供)安装在固相萃取装置上,上端连接Welchrom® Alumina-N 1g/6mL(P/N:WSAN010610)(上海月旭提供),用5 mL乙腈活化小柱,流出液弃去;
上样:将上述待净化液加入柱中,流出液弃去;
淋洗:用5 mL乙腈淋洗小柱后,弃去中性 Welchrom® Alumina-N小柱,然后将PRS抽干;
洗脱:5 mL乙酸乙酯:甲醇:氨水(50:45:5)混合溶液洗脱,收集洗脱液
40℃氮气吹干,1 mL流动相溶解,0.22μm针孔滤膜过滤后,待分析;
 

4. 色谱质谱条件

4.1 色谱条件
色谱柱: Xtimate C18 液相色谱柱(2.1mm*50 mm, 3 μm)(上海月旭提供)
流动相:
A: 0.1%甲酸+2 mM乙酸铵水溶液
B:乙腈
梯度洗脱
流速:0.4 mL/min
进样量: 10 μL
柱温:40°C
运行时间:12 min
4.2 质谱条件
扫描模式:MRM
离子源:ESI+
毛细管电离电压:3000v
干燥气温度:350 ℃
干燥气流速:11 L/min
雾化器压力:50 psi
 

名称 母离子 子离子 碎裂电压(Fragment)
 
驻留时间
(ms)
碰撞能量
(V)
定量离
子对
定性离
子对
孔雀石绿(MG) 329.2 313.1 140 30 40 + -
208.1 140 30 38 - +
隐性孔雀石绿(LMG) 331.2 316.1 140 30 20 + -
239.1 140 30 36 - +
MG-D5 334.2 334.2 140 30 318.2 - -
LMG-D6 337.3 337.2 140 30 322.2 - -

 
 

5. 结果

5.1 回收率和重现性实验
将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后,分别添加一定量的标准溶液,添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验,共3个批次(样品典型回收率色谱图见附图)。
 

添加水平(μg/kg)
 
分析物
0.5 2 10
Recovery (%) RSD (%) Recovery (%) RSD (%) Recovery (%) RSD (%)
孔雀石绿 110.8 7.53 98.1 6.56 96.1 4.71
隐性孔雀石绿 95.3 7.43 103.5 3.42 97.4 4.55

 
   
图1  鳕鱼中添加0.1 mg/kg 盐酸克伦特罗EIC谱图    图2  鳕鱼中添加0.1 mg/kg 莱克多巴胺EIC谱图

 

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作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年06月15日