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高效液相色谱法(HPLC)测定禽肉和禽蛋中拉沙里菌素的残留量(EEC,确证法 )

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高效液相色谱法(HPLC)测定禽肉和禽蛋中拉沙里菌素的残留量(EEC,确证法 )

Lasalocid-Determination of Lasalocid at Residue Levels in Poultry Muscle and Poultry Eggs
(EEC,Cy 4.2 Confirming Method)

安详操纵留意事项及施舍

弁言
拉沙里菌素是一种离子载体抗菌素。在养牛业顶用作发展促进剂并作为克制球虫剂用于养禽业。

1. 主题内容
本要领描写了禽肉样品中拉沙里菌素总量的检测要领。

2. 应用范畴
该要领合用禽肉和禽蛋,当经发射光谱逗留说明法确证后,用以下测定样品中拉沙里菌素的检测低限为10μg/kg。

3. 参考资料
93/256/EEC委员会决策,划定了行使激素或甲状腺克制物的残留物的测定要领。(OJ.No.L.118,14.4.93.pp 64-74)
2022/VI/84 文件 6.11 Ⅱ-4
ISO尺度78/2-1982尺度拟定—第二部门,化学说明尺度。
MAFF,1989, Determination of Lasalocid at residue levels in poultry muscle and eggs. Food Science Laboratory, Colney Lane, Norwich. Standard Operating Procedure

4. 界说
沙拉里菌素含量是用于暗示凭证所描写的要领检出的禽肉和禽蛋中的沙拉里菌素的量,并以μg/kg或mg/kg暗示。

5. 要领概要
该要领包罗6个步调
—组织样品在缓冲液中均质
—用有机溶剂提取
—固相二氧化硅柱提取
—HPLC紫外检测测定
—通过尺度曲线内插法并思量拉沙里菌素的接纳率尤其是组织样品的接纳率,来计较出拉沙里菌素的含量。

6. 仪器及试剂
6.1.1 三氯甲烷
6.1.2 四氯化碳
6.1.3 氯化钠
6.1.4 甲醇
6.1.5 无水硫酸钠
6.1.6 乙腈(色谱级)
6.1.7 正己烷
6.1.8 1,1,3,3-四甲基胍
6.2 溶液
6.2.1 饱和氯化钠溶液:氯化钠溶于水中至饱和
6.2.2 甲醇-三氯甲烷溶液:5mL甲醇用三氯甲烷配成100mL。
6.2.3 HPLC活动相:5mL 1,1,3,3-四甲基胍用乙腈稀释至1L。
6.3 尺度溶液
6.3.1 沙拉里菌素尺度品由提供。
6.3.2 尺度储蓄液:慎密称取约50mg沙拉里菌素溶于甲醇中并定容至250mL,储存于4℃,需当月制备。
6.3.3 中间尺度液:汲取1mL尺度储蓄液于10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,储存于4℃,需当日制备。
6.3.4 事变尺度液
6.3.4.1 汲取0.2mL中间尺度液,用HPLC活动相稀释至10mL,最终浓度为0.4mg/mL,当日制备。
6.3.4.2 汲取1mL事变尺度液(6.3.4.1),用HPLC液活动稀释至10mL,最终浓度为0.04ug/mL,当日制备。
6.4 添加措施
别离用50mL和125mL尺度事变液添加至5g样品,安排15min。

7 仪器装备
7.1 离心管:100mL
7.2 分液漏斗:250mL
7.3 全部玻璃过滤器:47mL
7.4 试管:125×16mm
7.5 梨形烧瓶:25mL
7.6 圆底烧瓶:250mL
7.7 玻璃移液管:1mL和10mL
7.8 均质器
7.9 旋涡混匀器
7.10 旋转蒸发器:水浴温度50℃
7.11 2mL和0.3mL自动进样瓶
7.12 1mL一次性打针器
7.13 离心机
7.14 超声波水浴
7.15 可调移液器:200μL和1000 μL
7.16 多路氮气蒸发可加热回响装置(40℃)
7.17 膜过滤器架:13mm
7.18 膜过滤筛:13mm和47mm
7.19 滤纸15cm
7.20 固相提取装置
7.20.1 真空荟萃管
7.20.2 硅胶萃取柱500mg/2.8mL
7.20.3 适配器
7.20.4 萃取柱用储液槽:75mL
7.20.5 柱子在行使前用5mL正己烷淋洗
7.21 HPLC-Water 590泵
柱:10cm×4.6mm Hypercarb 7μm添补
液动相速度: 0.5mL/min
荧光检测器:Philips PU 4027,引发波长3107nm,发射波长420nm
积分仪
进样器:进样25μL
柱子和活动相:恒温于35℃

8 样品和取样措施
有关要求见ISO文件78/2-1982 6.3.1节,下列注释源于2052/VI/84-EN附录Ⅱ和EEC 93/256。
8.1 样品的性状:样品应切合64/433/EEC指令中测定肉品及奶中药物残留的要求。
8.2 样品量:样品量应满意测定要领及复验所需量的要求。
8.3 样品的生涯和包装必需到达在尝试室中正确辨识的要求。
8.4 包装的要领,防腐以及转达必需保持样品的完备,而且差池检讨功效造成任何毛病。检讨沙拉里菌素的样品必需存放在-18℃以下。
用于说明的肉应从冷冻组织中切取薄片。大块样品不该被解冻。

9 测定步调
9.1 取2g禽肉组称织或均质的鸡蛋于25mL乙腈中均质,将均质样品放于超声水浴中5min,然后以3000rpm离心5min。
9.1 将上层液转移至250mL分液漏斗中。
9.2 剩余液用25mL乙腈再提取一次,并将上清液归并于分液漏斗中。
9.3 于分液漏斗中插手50mL四氯化碳和20mL饱和氯化钠溶液,振摇1min。
9.4 将基层有机相通过无水硫酸钠并用滤纸过滤至250mL圆底烧瓶中。
9.5 将滤液于旋转蒸发器上蒸发至干。
9.6 将残渣用3×2mL正己烷定量转移至硅胶萃取柱中。
9.7 拉沙里菌素残留用10mL甲醇-三氯甲烷溶液洗脱。
9.8 洗脱液转移至25mL梨形烧瓶中,并用旋转蒸发器蒸发至干。
9.9 残渣用0.5mLHPLC活动相消融后,于旋涡器上震荡15秒,并超声消融3min。
9.10 将样液转移至1mL一次性打针器中,并通过Millipore 0.45um滤盘过滤至HPLC进样管中。
9.11 尺度曲线
尺度添加0-100μg/kg于9.7步调中举办,每个点一再三次。
9.12 进样量25μL。

10 功效计较
在尺度浓度范畴内成立峰高与浓度校正曲线,每个样品的拉沙里菌素残留量通过峰高计较,并按照进样量僻静均接纳率(由添加样品)计较出测定功效(mg/kg)。尺度进样25μL等同于提取样100mg。

拉沙里菌素检出量
接纳率 % = ———————————— × 100
拉沙里菌素添加量
 

#p#分页问题#e#

拉沙里菌素μg(按照尺度曲线获得) 1 100
样品中拉沙里菌素含量(mg/kg)= —————————————————— × —— × ————
1000 0.05 接纳率%

当样品中拉沙里菌素的浓度高于尺度曲线的范畴时,提取液应稀释后进样,响应的体积系数应计较在内。
10.2 迅速度
回收此说明要领测定拉沙里菌素检测低限为10μg/kg。
10.3 质量担保措施
10.3.1 有用性:在10-100μg/kg程度上做了8个加标样品,提取操纵应在3天内完成,每一批应包罗空缺和加标样品。100μg/kg添加样品的接纳率为65-90%,批内和批间的精度度CV值小于15%。

11 非凡事例
假如样品中有阳性可疑的,可通过比拟可疑峰的发射谱说明可进一步确证。

12 要领留意点

13 质量节制
天天一批能说明16-20个样品,一批中包罗9-13个未知样及节制质量的加标样品。
空缺样品为原本说明过的不含拉沙里菌素的样品。

14 检测陈诉

15 缩写语
见手册中标12节附录I中缩写。

16.检讨流程图
组织 →插手乙腈 →均质 →过滤 →溶剂提取 → Sep-Pak硅胶柱 →过滤 →HPTLC
→功效计较


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年02月13日