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蜂蜜中糖的疏散(木炭柱色谱法Ⅰ)

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木炭柱色谱法Ⅰ     
A 道理
    先将蜂蜜样品吸附到木炭上,然后洗脱,依次流出的是单糖、二糖及多糖组分。二糖对葡萄糖及果糖测定的滋扰则可消除。洗脱回收逐渐增大醇浓度的要领,然后测定各类单糖,蔗糖、还原二糖〔以麦芽糖计〕,经水解后测三糖及更高级糖总量。
B 吸附柱的制备及尺度化
    柱外径为22mm,长为370mm,在其上部由一个35/20尺度锥度的球形讨论与一个1L的球形容器毗连。吸附剂由Darco G-60木炭与快速助滤剂按1+1比例殽杂构成。塞一个玻棉塞,从下部潮湿,加足量的干燥吸附剂到干燥的管中〔23-26cm〕,加真空体系,并小扣柱的上部,吸附剂的体积可被压缩为17cm。从管中撤除过量的木炭,并在上层加助滤剂,并轻轻压紧〔1-1.5cm〕。用500ml水及250ml 50%的乙醇洗柱子,并在50%乙醇介质中均衡留宿。在用水洗脱,压力为62KPa的环境下柱流速应在5.5-8.0ml/min之间。流速太慢会大大延缓说明速率。$$洗脱液中醇的含量应调解到得当于所行使木炭的保存手段。用250ml水洗净柱中的醇,定量地加含1g无水葡萄糖的10ml溶液到柱的上端,用吸气方法使其进入柱填料中〔但不要让柱干〕,在柱上端加300ml水,遏制吸气,加压〔小于便是69kPa〕,用称量过的烧杯接5份洗脱液,每50ml为一份。第一份50ml应包罗将样品引入柱中时吸出的10ml,将各份样品在蒸汽浴上蒸发,在80-100℃的真空箱中干燥,称重。$$从柱的上端倒出多余的水,别离用50ml 30%的乙醇和250ml水洗柱子,再加含1g无水葡萄糖的10ml 1%的乙醇液,一再色层疏散,用250ml 1%的乙醇溶液按上述沟通的方法洗脱。选择洗脱剂1,使其在150ml内能所有洗出葡萄糖,若须要可用2%的乙醇系统一再色层疏散。$$用250ml水和20ml 5%的乙醇别离洗柱子。在柱的上端加含100mg麦芽糖和100mg蔗糖的10ml 5%的乙醇液。按上述要领用250ml 5%的乙醇溶液洗脱,称量每50ml溶液蒸干后固体的量,须要时可别离用7,8和9%的乙醇洗脱以找出洗脱剂2,洗脱剂2应能在200ml内洗脱;大于便是98%的二糖。最先选择的洗脱剂1不该洗脱出二糖。对差异的木炭填料两种洗脱剂较量满足的组合方法为1%,7%;2%,8%和2%,9%,最后用100ml 50%的乙醇洗柱子,柱子生涯在该溶剂体系中。
C 各组分的制备
    用250ml H2O洗柱子,倒掉上端剩余的溶剂,加20ml洗脱剂1,使其通过柱子,弃去流出液,在50ml烧杯中把1g样品消融于10ml洗脱剂1中。用长颈漏斗将样品转移至柱的上端,并使其进入柱的填料中。用15ml洗脱剂1漂洗烧杯及漏斗,并插手到柱的上端。从引入样品开始网络全部的流出液到250ml容量瓶中。加250ml洗脱剂1,总共准确网络250ml〔流分1,单糖〕。倾倒出过量的溶剂,插手265-270ml洗脱剂2,用容量瓶网络250ml〔流分2,二糖〕。从上端倒出多余的洗脱剂,加110ml 5%的乙醇〔洗脱剂3〕,用容量瓶网络100ml〔流分3,三糖及三糖以上组分〕。将各组分充实摇匀。$$柱子在用50%的乙醇饱和下,将出口封住后可恒久生涯。行使8次后废弃。


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年11月20日