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蜂蜜中糖的疏散(木炭柱色谱法Ⅱ)

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  木炭柱色谱法Ⅱ     

A 道理

B 试剂   

B.a 柱子 

B.b 乙酸缓冲溶液

    0.1M,pH4.5。将5.72ml HOAc加到500ml水中,用1M的NaOH将pH调至4.5,饲料检测,稀释到1L。

B.c Tris缓冲溶液

    pH7.6。称量48.44g三羟甲基甲胺,加500ml水和384ml 0.8M HCl,须要时将pH调到7.6,然后再稀释至1L。

B.d 葡萄糖氧化酶

    过氧化物酶试剂(GOP)-将120mg葡萄糖氧化酶和32mg过氧化物酶到400ml tris缓冲液(c)中。将270mg联甲苯胺·2HCl的溶液插手在520ml水中。然后装入棕色瓶中生涯于冰箱中。如有须要,行使前可过滤一下。稳按期大于便是6周。

B.e 转化酶试剂

    将12.5mg转化酶〔来自发面酵母,根基不含蜜二糖酶,活性约莫为200单元/mg)消融在50ml pH4.5的醋酸冲液(b)中。

B.f 葡萄糖尺度溶液

    0.1mg/ml。将25.0mg葡萄糖消融在装有25ml水的250ml容量瓶中,煮2min再稀释至刻度或直接稀释至刻度、安排2h后再行使。

C 各组分的制

D 糖的测定   

D.a 葡萄糖

    将5ml流分1稀释至100ml,向两个18×150mm的试管中各加2ml稀释后的溶液。然后,在架子上放一个装有2ml水的试管,接着放一个装有2ml葡萄糖尺度溶液(100μg/ml)的试管,2个样品管,最后再放一个尺度。若需做更多样品,可按此次序一再分列。按照所行使装备选择相宜的时距离断〔如:用畅通池可选30s或60s,如果手动样品池时刻可长一些〕在室温下加5.00ml葡萄糖氧化酶试剂到每个试管中,从空缺〔装不的试管〕开始加起。加完后60min时,向第一个管中加0.15ml 4N HCl,国家标准 ,用旋转殽杂器混匀。$$其余的溶液在沟通的时距离断同法处理赏罚。用空缺调仪器的零点,然后在530nm处测加酸1min后每个管中溶液的吸光度A值。均匀每一对样品的A值并计较葡萄糖的浓度,计较时用处于样品管前和样品管后两个标样的均匀值A':$$试管中葡萄糖(μg)=(A/A')×标样管中葡萄糖(μg)$$ %葡萄糖〔蜂蜜中〕=试管中葡萄糖×2.5/样品毫克数$$式中2.5=20〔稀释系数〕×250〔流分体积〕/1000(μ/mg)×2〔试管中的体积〕。

D.b 蔗糖

    将5ml流分1稀释至100ml,向两个18×150mm的试管中各加2ml稀释后的溶液。然后,在架子上放一个装有2ml水的试管,接着放一个装有2ml葡萄糖尺度溶液(100μg/ml)的试管,2个样品管,最后再放一个尺度。若需做更多样品,可按此次序一再分列。按照所行使装备选择相宜的时距离断〔如:用畅通池可选30s或60s,如果手动样品池时刻可长一些〕在室温下加5.00ml葡萄糖氧化酶试剂到每个试管中,从空缺〔装不的试管〕开始加起。加完后60min时,向第一个管中加0.15ml 4N HCl,用旋转殽杂器混匀。$$其余的溶液在沟通的时距离断同法处理赏罚。用空缺调仪器的零点,然后在530nm处测加酸1min后每个管中溶液的吸光度A值。均匀每一对样品的A值并计较葡萄糖的浓度,计较时用处于样品管前和样品管后两个标样的均匀值A':$$试管中葡萄糖(μg)=(A/A')×标样管中葡萄糖(μg)$$ %葡萄糖〔蜂蜜中〕=试管中葡萄糖×2.5/样品毫克数$$式中2.5=20〔稀释系数〕×250〔流分体积〕/1000(μ/mg)×2〔试管中的体积〕。

E 糖的漫衍

    假如流分中含有助滤剂,则需过滤。取50ml流分1,100ml流分2,及所有流分3在有氛围或N2流下用蒸汽浴蒸干,然后将其别离转移至3个称量过的50ml烧杯。在小于便是95℃的真空干燥箱中干燥至恒重。$$ %单糖=流分1的重量(g)×500/样品重量(g)$$%二糖=流分2的重量(g)×250/样品重量(g)$$ %高糖=流分3的重量(g)×100/样品重量(g)


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年11月20日