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固相萃取-HPLC法测定蜂蜜中残留的1O种磺胺类药物

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    磺胺类药物是以对氨基苯磺酰胺为根基化学布局的一类合成抗菌药物,因为代替基的差异,发生很多差异的磺胺药。这类药物普及用作牲口的抗菌药 在蜂产物中该药物的残留对人类康健有隐藏的危害,可在过敏性病人中引起过敏回响可能使病原体有机体发生抗药性。几种磺胺类药物同时测定的要领已有报道,但这些要领根基上均行使长时刻的萃取和洗脱进程来得到满足的迅速度。用高效液相色谱-荧光检测器对磺胺类药物残留测定,溶剂的极性、pH、溶氧量、溶剂的氢键、温度等城市影响荧光的发射强度或波长,且线性范畴窄。固然回收荧光检测器或柱后衍生化可得到必然专属性,但这些说明本领必要昂贵的仪器和特另外装备。倒霉于推广和实验国度尺度。
我们回收固相萃取-高效液相色谱法成立快速、专属的蜂产物中磺胺类药物含量的测定要领。该体系不必要特另外柱后体系的仪器,所用的试剂得当于HPLC要领测定,紫外检测器受到的影响身分较小,线性范畴宽,且迅速度可以或许满意10种磺胺类药物含量的同时测定,较其余要领测定磺胺类药物种类多且专属性好的利益。
1 尝试部门
1.1 试剂
乙腈和甲醇为色谱纯,水为Milli-Q SP TOC超纯水;三氯甲烷、磷酸、磷酸二氢钠、氢氧化钠和无水乙醇等其他试剂均为说明纯。
10%的碱性氯化钠溶液:称取氯化钠10.0 g,加0.1 mol/L的氢氧化钠消融并稀释至100 mL。
1.0 mol/L的磷酸二氢钠缓冲液:称取磷酸二氢钠120g,加水消融并稀释到1000mL,用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调理pH为6.0。
磺胺尺度品:磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嗯唑、磺胺二甲基异 唑、磺胺喹嗯啉尺度品,纯度≥99.O%(Sigma公司提供)。尺度溶液配制:精确称取10mg的每种磺胺尺度品于100mL容量瓶中,用甲醇消融并定容,得0.1 mg/mL的尺度储蓄液。生涯在4℃冰箱中,有用期为3个月。按照必要,临用时用活动相稀释成尺度事变溶液。
1.2 仪器与装备
美国Agilent-1100型高效液相色谱仪,配有G1314A紫外检测器和HPCHEM色谱打点体系,液相色谱柱:LiChrospher RP018e 250×4mm i.d.5μm,预柱Merck C18 10×4mm i.d.5μm。
瑞士BUSHI Rotavapor R-200型旋转蒸发器,配有LAuDA wKI|230型轮回水式冷却体系。美国SUPELCOVisiprep DL SPE型固相萃取装置;固相萃取真空装置为SHZ—D(Ⅲ)轮回水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂出产);Oasis,HLB型固相萃取小柱(3 cc(60 mg)C18 Warers)。
1.3 样品预处理赏罚
1.3.1 样品的提取称取1O.O0 g样品于5OmL的具塞离心瓶中,插手5mL 5%的乙醇一水溶液涡旋混匀,使蜂蜜完全溶于乙醇一水溶液中(蜂蜜若有析出结晶的征象,在低于60℃的水中加热,使其完全消融,殽杂后再称样),插手15mL三氯甲烷,旋涡混匀3min,离心3min,转移三氯甲烷于另一磨口离心管中,残渣用1OmL三氯甲烷提取1次,归并三氯甲烷。将三氯甲烷于40℃下浓缩至干,插手4mL10%的碱性氯化钠溶液混匀消融残渣。插手5mL磷酸二氢钠缓冲液,于旋涡殽杂器上混匀2O s。
1.3.2 样品净化将带有阀的玻璃贮液器毗连到Oasis HLB固相萃取柱上,上述混匀后的溶液倒入玻璃贮液器中,在减压前提下样液度日化好的固相萃取小柱。待样品溶液过柱完成后,加15-nL超纯水淋洗,抽真空5min,然后用5min乙腈洗脱于试管中。将乙腈洗脱液于40℃水浴中高纯氮气流浓缩至干,活动相消融并定容至1 mL,0.45μm的微孔滤膜过滤供液相色谱说明。
1.4 液相色谱前提
活动相:A为0.O1 mol/L磷酸水溶液,B为乙腈: AB二元梯度洗脱措施:0~5 min(A与B体积比85:15),5~10 min(A与B体积比75:25),10~14 min(A与B体积比65:35),最后回到初始前提;流速1.0 mL/min;柱温45℃;紫外检测波长270 nm。应用此色谱前提可得到精采的疏散和相宜的保存时刻,各组分均在15min内出峰。
2 功效与接头
2.1 提取溶剂的选择
磺胺类药物一样平常为白色或微黄色结晶性粉末,难溶于水,较易溶于稀酸、稀碱和有机溶剂。别离选用乙腈、三氯甲烷和甲醇作为蜂蜜样品的提取溶液,在统一添加程度,沟通尝试前提下,对蜂蜜样品举办接纳率尝试,尝试数据可以看出,行使三氯甲烷作提取剂,1O种磺胺类药物的接纳率根基上在90%以上,乙腈和甲醇的接纳率明明低于三氯甲烷作为提取溶剂的接纳率。并且行使乙腈和甲醇,均呈现样品基底滋扰大,图潜的基线漂移征象。因此在本要领中选择三氯甲烷作为蜂蜜样品的提取溶液。
2.2 色谱柱的选择
尝试发明,差异型号的色谱柱对磺胺类药物的疏散结果有必然的影响。我们选择了以下5种差异型号与长度的色谱柱:LiChrospher 100 RP-18e 250X 4 mm i.d.,5μm;Kromasil KR 100-5 C18 250X 4.6 mmi.d.,5μm;Kromasil C18 150X 4.6 mmi.d.,5μm;Agilent ZORBAX Eclipse X DB-C 8 150X 4.6 min i.d.,5μm;ALLTIMA C18 150X 4.6 Mvm i.d.,5μm。尝试功效表白,长色潜柱比短色谱柱的测定结果好,10种磺胺类药物有用疏散且峰形好,不拖尾,基线相对安稳: 但若行使Kn,masil C18长柱作为说明柱,保存时刻过长,磺胺喹嗯啉出峰必要1个多小时,迅速度也有低落。因此,选择LiChrospher 100 RP-18e 250mmi的长色谱柱为说明柱,梯度洗脱,10种磺胺类药物在15min内完全疏散,迅速度也能满意说明的要求。
2.3 活动相选择
我们选择4种液相疏散前提,确定了吻合的疏散前提。全部组分在15 min内出峰,满意快速说明要求。其它3种液相色谱前提均未能将10种磺胺类药物完全疏散,尤其是磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲噻二唑,在这3种前提下,两色谱峰重合。
2.4 要领的线性相关
以乙腈为溶剂,配制磺胺类药物尺度系列溶液浓度为0、0.10、0.20、0.50、0.75、1.00μg/mL于容量瓶中,进样量20μL外标法定量。其线性方程和相相关数。
2.5 要领的慎密度和接纳率尝试
用不含有磺胺类药物的蜂蜜试样举办添加接纳率和慎密度尝试,样品别离添加0.050 0、0.100、0.125、0.250、0.500μg/mL 5个浓度程度的磺胺药物尺度溶液,摇匀,密封安排2 h,使尺度溶液被样品充实接收,然后凭证样品前处理赏罚要领举办提取和净化,高效液相色谱测定(接纳率尝试各浓度均一再测定5次)。可以看出,在0.010~10μg/mL范畴,5个添加程度接纳率为82.4%~95.6%,相对尺度毛病为3.5%~8.1%。接纳率较高,相对尺度毛病低,要领的重现性较好。
2.6 要领检出限和最低检测浓度
10种磺胺类药物样品添加浓度为0.01mg/kg,谱图的信噪比均大于10。因此,在本要领操纵前提下10种磺胺类药物定量下限为0.005 mg/kg,当试样称样量为10.00 g,定容量为1mL时,检出限为0.5μg/kg。其检出限尺度图谱。
2.7 要领的合用性
对差异蜜种的几批蜂蜜样品随机抽样得l0个样品,在100、250、500ng/mL 3个添加程度,别离举办10种磺胺类药物的添加接纳率尝试,所做样品空缺尝试证明,在10种磺胺类药物出峰地区里,未见滋扰峰呈现,声名要领的选择性很好。
3 结 论
固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的磺胺类药物,因为前处理赏罚行使固相萃取小柱,可以解除蜂蜜中大部门滋扰物质的影响。行使紫外检测器,可以或许到达很高的迅速度,担保了外标法定量的精确性和重现性。与其他要领对比,本要领具有快速、迅速、专属的特点。

相关标准:

GH/T 18796-2012 蜂蜜

GB 9697-2008 蜂王浆

GH/T 1014-1999 蜂花粉


 


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年10月07日
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