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蛋制品中违禁合成性激素多残留检测方法研究

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    合成性激素制剂因其可以促进动物的生长、促进饲料的转化效率而在农业饲养中已经有50 年的应用历史。但许多研究认为, 儿童性早熟、妇女乳腺癌和子宫癌发病率上升与动物性食品中性激素残留有关 。欧盟在1996 年、中国在2002 年颁布法令, 禁止合成性激素在食品动物中应用。然而, 罗晓燕等于2005 年曾检测出个别畜禽组织中含有0.16mg kg 的丙酸睾酮, 说明仍然有人在非法使用合成性激素饲养畜禽, 以达到促生长的目的。所以开发动物性食品中合成性激素残留多组分检测方法, 杜绝合成性激素的非法使用,对保障食品安全、保护广大消费者的身体健康就显得十分重要。

    动物性食品中性激素残留的多组分检测方法研究一直是食品安全工作者研究的热点, 前些年气相色谱-质谱(GCMS)法多残留检测的研究成果报道[5 ~ 7] 较多。但因GC-MS 法需要衍生化后才能检测, 显得较为繁琐。高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS MS)因其灵敏度高、不需要化学衍生化处理而成为众多科学家在性激素残留检测中的首选[ 1,8 ~ 10] 。然而, 在已报道的研究工作中, 大多集中在动物组织、牛奶、牛毛等方面, 很少有禽蛋及其制品中性激素多残留检测的报道。禽蛋及其制品中大量的卵磷脂在样品中难以除去, 容易导致净化过程中固相萃取柱和过滤头的堵塞, 从而给禽蛋及其制品中性激素残留的检测造成困难。Yang 等[ 11] 利用基质固相分散萃取技术净化了测试样品, 成功的检测了鸡蛋中8 种孕激素。现行国家标准[ 12] 在净化阶段往往使固相萃取柱堵塞而使实验无法正常进行。我们在研究中发现, ZnCl2 能够在性激素的甲醇提取液中将卵磷脂沉淀, 从而解决了固相萃取柱及过滤头堵塞的问题。基于此, 本文建立了以ZnCl2 除脂、固相萃取柱净化、多反应监测模式下采用正离子电离模式建立了测定禽蛋制品中7 种合成性激素残留的检测方法。

1  材料与方法
1.1  仪器与设备
    ACQUITYTM 超高效液相色谱仪(Waters 公司)、QuattroPremier XE 质谱仪(Waters 公司);超声波清洗器(宁波海曙超声仪器公司);旋转蒸发仪(R-210, BǜCHI 公司);TG16-WS 高速离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司);SC-8L-150 数控固相萃取仪(广州智真生物科技有限公司);氮吹仪(上海安谱仪器公司)。LC-C18 固相萃取柱(supelco 500mg , 3ml)。LC-NH2固相萃取柱(supelco 500mg , 3ml)。甲醇为色谱纯(merck), 甲酸色谱级(纯度为88 %, Acros Organics 公司), 实验用水均为超纯水(Millipore 公司超纯水器制备, 电阻率为18.2 18.2 MΨcm)。

1.2  试剂
    激素标准品:甲基炔诺酮(Norgestrel), 甲基睾酮(Methyltestosterone), 丙酸睾酮(Testosterone propionate), 醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroue Acetate), 醋酸甲地孕酮(Megestrolacetate), 醋酸氯地孕酮(Chlormadinone acetate), 诺龙(Nandrolone)(所有标准品纯度均大于或等于98 %, 除甲基炔诺酮购于Sigma 公司外, 其他均为Dr .Ehrenstorfer GmbH 试剂), 氘代诺龙(Nandrolone-d3 , Toronto Research Chemicals Inc)标准储备液及工作液的配制:分别称取标准品各l0.0 mg , 用甲醇溶解后转移至10ml 棕色容量瓶中, 以甲醇定容得1mg ml 标准溶液, 于-18℃ 条件下保存。稀释1000 倍, 得1μg ml 标准溶液。混合标液配制:以80%甲醇水溶液配制激素不同浓度的混合标准工作溶液, 每一标准工作溶液中内标物氘代诺龙浓度均为10ng ml。酶解液:β-葡萄糖苷酸酶 芳基硫酸酯酶(EC3.2.1.31 +EC3.1.6.1, Helix pomatia , sigma-aldrich)。

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作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年08月02日