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应用液相色谱法测定水产中的磺胺含量

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 范畴

本尺度划定了水产物中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基异噁唑残留量的液相色谱测定要领。

本尺度合用于水产物中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基异噁唑残留量的测定,其余磺胺类药物的测定可以参照本尺度。


 

类型性引用文件

下列文件中的条款通过本尺度的引用而成为本尺度的条款。往往注日期的引用文件,其随后全部的修改单(不包罗勘误的内容)或修订版均不合用于本尺度,然而,勉励按照本尺度告竣协议的各方研究是否可行使这些文件的最新版本。往往不注日期的引用文件,其最新版本合用于本尺度。


 

GB/T6682说明尝试室用水规格和试验要领


 

道理

用乙酸乙酯提取,稀盐酸反提取,正己烷脱脂,荧光胺衍生,反相色谱柱疏散,荧光检测器检测,磺胺5-甲氧嘧啶为内标物,内标法定量。


 

试剂

本尺度所用试剂在磺胺类药物出峰处应无滋扰峰,尝试用水应切合GB/T6682中一级水尺度。


 

尺度品:磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异噁唑,磺胺5-甲氧嘧啶,纯度均大于98.0%。

丙酮:色谱纯。

正己烷:色谱纯。

乙酸乙酯:色谱纯。

乙腈:色谱纯。

甲醇:色谱纯。

荧光胺:纯度大于99.0%。

乙酸钠:说明纯。

冰乙酸:优级纯。

盐酸溶液:2mol/L,量取180mL盐酸,加适量水并稀释至1000mL。

乙酸钠溶液:3.5mol/L,称取28.7g无水乙酸钠溶于蒸馏水中,定容至100mL。

荧光胺溶液:2mg/L,称取0.03g荧光胺,加15mL丙酮,振摇至完全消融,存放在暗处。现配现用。

尺度储蓄液:100mg/L,称取尺度品10mg(称准至0.1mg),用甲醇消融并定容至100mL。避光冷藏生涯,生涯期为一个月。

殽杂尺度中间液:1mg/L,移取尺度储蓄液各1.00mL,用甲醇稀释并定容至100mL,在室温下混匀。

内标储蓄液:100mg/L,称取磺胺5-甲氧嘧啶尺度品10mg(称准至0.1mg),用甲醇消融并定容至100mL。避光冷藏生涯,生涯期为一个月。

内标中间液:1mg/L,移取内标储蓄液1.00mL,用甲醇稀释并定容至100mL,在室温下混匀。

殽杂尺度行使液:取殽杂尺度中间液20μL、40μL、100μL、200μL、400μL,别离插手内标中间液100μL,用2mol/L盐酸(4.10)稀释至2mL,配成浓度别离为0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L的殽杂尺度行使液,个中内标浓度为0.05mg/L。


 

仪器与装备

液相色谱仪:配荧光检测器。

电子天平:感量0.0001g。

电子天平:感量0.01g。

高速组织捣碎机。

均质机。

离心机。

旋涡混匀器。

氮吹仪。

来去式振荡器。

聚丙烯离心管:15mL、50mL。

容量瓶:10mL、20mL、50mL、100mL、200mL、500mL、1000mL。

玻璃移液管:1mL、2mL、5mL、10mL。

巴斯德吸管。


 

色谱前提

色谱柱:ODS-C18,5μm,4.6mm×250mm,或同范例号色谱柱。

柱温:45℃。

活动相:乙腈 乙酸溶液(38 62),500mL水中插手冰乙酸调理pH至3.0配制成乙酸溶液。

流速:1mL/min

进样量:20μL。

引发波长:405nm。

发射波长:495nm。


步调说明


样品制备


 

从原始样品中取出部门有代表性的样品,高速组织捣碎机捣碎。四分法缩分出不少于500g样品,混匀,均分成两份。装入洁净容器,加封,标明标志。-18℃以下冷冻生涯。


 

提取


 

将样品解冻,称取2.00g,置于50mL聚丙烯离心管,插手磺胺5-甲氧嘧啶尺度中间液(4.16)100μL,用玻璃棒搅匀,再加乙酸乙酯10mL,均质机14000rpm均质1min,来去式振荡器振动10min,3000rpm离心10min,将乙酸乙酯层警惕转移到15mL具塞刻度试管中,40℃以下氮气吹至2mL。再向原离心管中插手乙酸乙酯10mL,旋涡混匀30s,振动10min,3000rpm离心10min,将乙酸乙酯层警惕转移到原15mL具塞刻度试管中,40℃以下氮气吹至5mL。然后在试管中插手2.00mL2mol/L的盐酸溶液,旋涡混匀1min,国家标准 ,加盖后振动10min,3000rpm离心8min,用巴斯德吸管移去乙酸乙酯层,在余液中插手正己烷5mL,旋涡混匀30s,3000rpm离心8min,用巴斯德吸管移去正己烷层,0.45μm微孔滤膜过滤,滤液备用。

衍生
 

向样品瓶中插手200μL殽杂尺度行使液或样品提取液、200μL乙酸钠溶液和80μL荧光胺溶液,旋涡混匀30s,20min后供液相色谱说明。


 

色谱说明


 

取衍生后的样品提取液20μL进样,记录峰面积,相应值均应在仪器检测的线性范畴之内。按照尺度样品的保存时刻定性,内标法定量。磺胺类药物色谱说明图拜见附录A。


 

事变曲线


 

称取空缺样品2.00g,别离添加殽杂尺度中间液(4.14)20μL、40μL、100μL、200μL、400μL,样品中每种磺胺残留量别离为0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg,按7.2、7.3、7.4操纵,以磺胺峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标,磺胺含量为横坐标,绘制事变曲线。


 

计较


 

用色谱数据处理赏罚软件或按下式计较样品中磺胺残留量:


 

式中:


 

X——样品中磺胺残留量,单元为毫克每千克(mg/kg);


 

s——样品溶液中磺胺峰面积,单元为counts;


 

s1——样品溶液中内标峰面积,单元为counts;


 

S——尺度溶液中磺胺峰面积,单元为counts;


 

S1——尺度溶液中内标峰面积,单元为counts;


 

x——加标样品中磺胺残留量,单元为毫克每千克(mg/kg)。


 

要领接纳率


 

浓度范畴为0.010mg/kg~0.10mg/kg时,接纳率见接纳率表。


 

接纳率表


 

名称


 

接纳率


 

磺胺嘧啶


 

88.0%~111.8%


 

磺胺甲基嘧啶


 

90.0%~110.8%


 

磺胺二甲基嘧啶


 

91.0%~110.1%


 

磺胺甲基异噁唑


 

107.0%~116.7%


 

要领检出限


 

本要领检出限为0.010mg/kg。


 

慎密度


 

在一再性前提下得到的两次独立测定功效的绝对差值不得高出算术均匀值的15%。


 


 


 


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年06月15日