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蛋和蛋成品中的β-羟基丁酸、乳酸和琥珀酸说明要领——气相色谱法

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A 试剂
    
A.a 三氟化硼-1-丙醇溶液
    10%。制备如下:在透风橱里,按下列次序或按与此相等的气路次序安装,一前一后毗连到有几节短聚四氟乙烯管的BF3气瓶,把250ml PrOH转入瓶底,称重,并在冰浴中冷却,把冰浴中的瓶毗连到气路中,逐步将BF3气泡鼓入PrOH直到接收22g为止〔在放入管子之前,到从PrOH取出,玻璃管必需一向通以BF3,假如插手的BF3高出22g,用PrOH稀释到PrOH的总毫升为11.4×g BF3。试剂贮存在玻璃具塞瓶中,放入冰箱。$$市售试剂14%(w/v),不加稀释即可用,也可用1vol+0.6vol PrOH稀释液,注:要用有用的排风装备撤除BF3蒸气,以免打仗到皮肤,眼睛和呼吸体系。
A.b 乳酸钙尺度溶液
    当天新配。把0.856g USP乳酸Ca·5H2O溶于H2O,稀释到100ml〔溶液A:5.0mg乳酸当量/ml〕,用H2O别离将25,20,15和5ml溶液A稀释到50ml,配制含量为2.5(B),2.0(C),2.0(C),1.5(D)和0.5(E)mg乳酸当量/ml的溶液。
A.c 琥珀酸尺度溶液
    当天新配。将1.000g琥珀酸溶于H2O,并稀释到100ml〔溶液F:10.0mg/ml〕。别离将25,25和15ml溶液F用H2O稀释到50,100和100ml,配制含5.0(G) , 2.5(H)和1.5(I)mg/ml的溶液。
A.d 苯乙酮〔AP〕溶液
    
A.d.1 尺度溶液
    把0.800g苯乙酮溶于PrOH,并在容量瓶中稀释到100ml,室温下生涯。
A.d.2 稀释溶液
    当天新配。移取20ml PrOH,10ml AP尺度溶液I和20ml CHCl3放入125ml疏散器〔若GC体系不能行使CHCl3,可用醚取代。然而用醚举办色谱疏散,必需在酯化浸染后24h内举办〕。加40ml饱和的(NH4)2SO4溶液,塞好,动摇疏散器1min,使液层分隔,倾轧底部的水层,弃去,将上层转入玻璃塞细口瓶加5g无水Na2SO4。
A.e 醚
    无水的,乙醇含量不高出0.05%。
A.f β-羟基丁酸钠尺度溶液
    把0.121gβ-羟基丁酸钠溶于H2O,稀释到100ml〔1mgβ-羟基丁酸钠当量/ml〕。
B 仪器
    
B.a 气相色谱仪
    具在火焰离子检测器。操纵前提:用100-120目,载带10%丁二酸二乙二醇酯〔DEGS〕Gas-Chrom Z添补3m×4mm内径的玻璃管。温度〔℃〕:柱温130,打针口200,检测器200;He 80ml/min;H 37ml/min;氛围400ml/min;电流计满标迅速度9×10^-10^A;5mV记录仪;记录纸速率50cm/h。
B.b GC柱
    在250ml烧杯中,将1.2g不变的DEGS溶于100ml丙酮,加10.8g100-200目Gas-Chrom Z到DEGS-丙酮溶液中。在蒸气浴上蒸发丙酮,不时用玻璃棒搅动,放入50-60℃真空炉内完全蒸发1h。用丙酮冲洗GC管,并用真空干燥。用5%二甲基二氯硅烷的甲苯溶液装满管,安排5min。用MeOH冲洗管子直到洗液对石蕊显中性〔约300ml),真空干燥。用涂好的载体添补管,划定在200℃通入约30ml/min的N2气流48h。也许会打仗快速加热柱子的入口部门不要添补。〔任何给定丙基酯的等效疏散柱均可行使〕。
B.c 过滤漏斗
    约35mm直径的短茎玻璃漏斗。$$ $T表15-1 校正气相色谱的尺度溶液$$组合/乳酸钙(b)^a^ mg^b^/乳酸钙(b)^a^ ml/乳酸钙(b)^a^ 尺度溶液/琥珀酸(c)^a^ mg/琥珀酸(c)^a^ ml/琥珀酸(c)^a^ 尺度溶液$$1/1/2/E/3/2/I$$2/3/2/D/5/2/H$$3/4/2/C/7.5/3/H$$4/5/2/B/10/2/G$$5/6/4/D/15/3/G$$ 6/8/4/C/20/2/F$$7/10/2/A/25/5/G$$8/12.5/5/B/30/3/F$$9/15/3/A/40/4/F$$a.参测验剂下边溶液的字母。$$b.乳酸当量。$T
C 校准
    
C.a 乳酸和琥珀酸
    见表15-1用于校准的尺度溶液。对付每一组合按表中列出的体积移取乳酸钙和琥珀酸尺度溶液,放入250ml$24/40圆底烧瓶,在蒸汽浴上蒸发至干,或在100℃旋转蒸发器上更快地蒸干。取出仅够1天用的BF3-PrOH,放入25ml带玻璃塞的锥形瓶。移取2ml BF3-PrOH放入25ml圆底烧瓶,将短茎漏斗(c)插入瓶颈,以蒸气浴上回流10min。$$从蒸气浴中取出,冷却到室温,加4ml饱和(NH4)2SO4,移取1ml AP尺度溶液和2ml CHCl3入瓶,振荡殽杂〔假如GC体系不能用CHCl3,可用醚取代。然而,必需在酯化后24h内用醚举办色谱疏散〕。把瓶的内容物倒入30ml疏散器,塞好,摇1min,使之分层。放出底层并弃去,把上层转入螺口玻璃瓶,插手约3g无水Na2SO4,用Al箔挡住,用帽密封,简短地动摇。假如在制备往后行使,应存放在冰箱中。$$调理气相色谱仪的迅速度和衰减,以便不加稀释即合用于标样范畴〔对换理好的气相色谱仪,内标(AP)的峰高约为满度的1/3〕,对付标样和样品溶液的校准应行使同样的衰减和迅速度配置。$$用GC疏散溶液时,把打针针头通过Al箔插入。将3±0.2μl清液注入气相色谱仪。平行二次,对每次进样都要丈量峰高并计较每种酸的峰高比r,以r值对W做出校正曲线。对付每一种酸,r=酸性脂的峰高/内标〔AP〕峰高,W=用PrOH酯化的总酸量mg。$$当溶剂峰拖尾进入乳酸丙酯峰区时,将会延迟溶剂峰的尾端,似乎不存在此外峰一样。用该延迟线作为基线丈量乳酸丙酯的峰高。
C.b β-羟基丁酸
    见表15-1用于校准的尺度溶液。对付每一组合按表中列出的体积移取乳酸钙和琥珀酸尺度溶液,放入250ml$24/40圆底烧瓶,在蒸汽浴上蒸发至干,或在100℃旋转蒸发器上更快地蒸干。取出仅够1天用的BF3-PrOH,放入25ml带玻璃塞的锥形瓶。移取2ml BF3-PrOH放入25ml圆底烧瓶,将短茎漏斗(c)插入瓶颈,以蒸气浴上回流10min。$$从蒸气浴中取出,冷却到室温,加4ml饱和(NH4)2SO4,移取1ml AP尺度溶液和2ml CHCl3入瓶,振荡殽杂〔假如GC体系不能用CHCl3,可用醚取代。然而,必需在酯化后24h内用醚举办色谱疏散〕。把瓶的内容物倒入30ml疏散器,塞好,摇1min,使之分层。放出底层并弃去,把上层转入螺口玻璃瓶,插手约3g无水Na2SO4,用Al箔挡住,用帽密封,简短地动摇。假如在制备往后行使,应存放在冰箱中。$$调理气相色谱仪的迅速度和衰减,以便不加稀释即合用于标样范畴〔对换理好的气相色谱仪,内标(AP)的峰高约为满度的1/3〕,对付标样和样品溶液的校准应行使同样的衰减和迅速度配置。$$用GC疏散溶液时,把打针针头通过Al箔插入。将3±0.2μl清液注入气相色谱仪。平行二次,对每次进样都要丈量峰高并计较每种酸的峰高比r,以r值对W做出校正曲线。对付每一种酸,r=酸性脂的峰高/内标〔AP〕峰高,W=用PrOH酯化的总酸量mg。$$当溶剂峰拖尾进入乳酸丙酯峰区时,将会延迟溶剂峰的尾端,似乎不存在此外峰一样。用该延迟线作为基线丈量乳酸丙酯的峰高。
D 测定


 


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年05月22日