葡萄酒中甜蜜素的含量测定

    甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)是一种甜味剂,甜度是蔗糖的5O倍。目前,我国允许甜蜜素作为食品添加剂在多种食品中使用,在GB276001996《食品添加剂使用卫生标准》中对添加量作出明确的规定,葡萄酒中添加的最高限量为0.65s/kg。但有些生产厂家为了降低成本和改善口感,在葡萄酒中超量加入甜蜜素,损害了消费者的身体健康。食品中环已基氨基磺酸钠(甜蜜素)的测定标准是GB/TS009.97-2003 ,该标准规定了食品中环已基氨基磺酸钠的三种测定方法-气相色谱法、比色法、薄层层析法,其中气相色谱法采用填充柱。
本研究利用毛细管气相色谱法测定葡萄酒中的甜蜜素,并对葡萄酒中甜蜜素提取方法作了改进,采取直接离心而无需将存在于正己烷中的环己醇亚**酯取出后再离心,简化了前处理过程,缩短了分析时间。回收率试验结果表明,本方法准确可靠。应用本方法对36份葡萄酒样品中甜蜜素进行了检测,并对不合格葡萄酒样品进行了质谱确认。

1 材料与方法
1.1 仪器和试剂
    Agilent6890N/5973N气相色谱-质谱仪(Agilen公司),Agilent6890N气相色谱仪(Agilent公司),带FID,配备7683自动进样器和增强型化学工作站;CENMTRIKON T-124高速冷冻离心机(Kontron公司)。正己烷(分析纯,用全玻璃蒸馏装置重蒸馏)、氯化钠(分析纯百分之650 灼烧4h)、三重蒸馏水。标准溶液配制:甜蜜素标准品(Dr.Ehrenstorfer公司)用三重蒸馏水配制成10mg/ml标准储备液。
1.2 色谱、质谱分析条件
    气相色谱采用DB-1毛细管色谱柱,30 m×0.25mm×0.25um(膜厚),分流/不分流进样口,进样口温度l5O摄氏度,脉冲不分流进样;载气:高纯氮气(纯度百分之99.999),流速1.0ml/min;程序升温:5O摄氏度 保留0.75 min,以45摄氏度/min升至95摄氏度,保留1min,再以40摄氏度/min升至115摄氏度,保留0.5min,再以3O摄氏度/min升至145摄氏度,保留1.25 min,全部程序时间6.0min;FID温度200摄氏度,氢气:30ml/min,空气:400ml/min,补偿气:氮气,流速为35ml/min;自动进样,进样量ul 。
    质谱采用EI方式:EM 电压为自动调谐值,电离能量7OeV,离子源温度230摄氏度,四极杆温度l5O摄氏度,接口温度280摄氏度;扫描方式:全扫描,扫描质量(m/z)范围:5O~300;溶剂延迟时间为2.6min。采用HP-5MS毛细管色谱柱,30 m×0.25 mm×0.25um(膜厚),分流/不分流进样El,进样El温度200摄氏度,脉冲不分流进样;载气:高纯氦气(纯度百分之99.999),流速1.0ml/min;程序升温:60摄氏度 保留lmin,以1O摄氏度/min升至100摄氏度,再以40摄氏度/min升至180摄氏度,全部程序时间7.0min;自动进样,进样量ul。
1.3 标准曲线的制作
    分别准确吸取10ms/ml甜蜜素标准储备液0.02、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 ml于100 ml具塞聚乙烯离心管,加水至2Oml,置冰浴中,然后按1.4自“加入5ml 5Og/L亚**钠溶液”起操作。当葡萄酒取样量为2O.0 g时,分别相当于0.O1、0.05、0.25、0.50、1.00、2.5Og/kg。以甜蜜素的浓度为横坐标(x),相对应的峰面积为纵坐标(Y)得出回归方程:Y为7432.1 X-3O.8,r为0.99987。
1.4 样品处理
    准确称取20.0 g去除酒精的葡萄酒样品于100 ml具塞聚乙烯离心管,置冰浴中,加入5ml 5Og/L亚**钠溶液,5ml 100g/L**溶液,摇匀,在冰浴中放置30min,并经常摇动,然后准确加入10ml正己烷,5g氯化钠,振摇8O次,然后4000 r/min离心10min,用吸管取出上层正己烷供气相色谱分析。
2 结果和讨论
2.1 样品处理方法的改进
    GB/T5009.97-2003中的样品处理方法为:准确称取20.0 g去除酒精的葡萄酒样品于100ml带塞比色管中,置冰浴中,加入5ml 5Og/L亚**钠溶液,5 ml 100s/L**溶液,摇匀,在冰浴中放置30min,并经常摇动,然后准确加入10ml正己烷,5g氯化钠,振摇8O次,待静置分层后吸出上层正己烷于10ml带塞离心管中进行离心分离,上层正己烷供气相色谱分析。在实际测定中,由于样品处理过程中产生大量的泡沫,静置后易形成乳化,无法分层,很难吸出上层正己烷。本文采用1.4样品前处理方法,简化了操作步骤,缩短了样品前处理的时间,同时解决了乳化不分层的难题。
2.2 实验中注意事项
    样品处理过程中,加入5 ml 50g/L亚**钠溶液,5ml 100g/L**溶液,摇匀,应注意开始振摇时应缓慢,并不时打开离心瓶盖放气,以免离心瓶盖被冲开,液体飞溅,造成人身损害及实验事故。

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