食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定高效液相色谱法
1.食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定 道理
样品中脂溶性维生素在皂化进程中与脂肪疏散，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。
2. 食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定合用范畴
本要领来历于GB/T 5413.9-1997。合用于婴幼儿配方食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定；也合用于食物或强经食物及饲料中的维生素D含量的测定。
3. 食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定首要仪器
1) 高压液相色谱仪，具有可变波长的紫外检测器，数据处理赏罚体系或记录仪。
2) 旋转蒸发器。
3) 平底烧瓶：250mL。
4) 分液漏斗：500mL。
4. 试剂
全部试剂，如未注明规格，均指说明纯，所尝试用水均指蒸馏水。
1) 异丙醇：色谱纯。
2) 2％焦性没食子酸乙醇溶液：取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。
3) 75％氢氧化钾溶液：取75g氢氧化钾溶于100mL水中。
4) 石油醚：沸程30～60℃。
5) 甲醇：色谱纯。
6) 正己烷：色谱纯。
7) 环己烷:色谱醇。
8) 维生素D尺度溶液
A. 维生素D2尺度贮备液：含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。
B. 维生素D3的尺度贮备液：含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。
5. 操纵步调
5.1样品处理赏罚：精确称取10g样品，于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。
5.2测定液的制备：
1) 于上述样品溶液中插手100mL的20％没食子酸乙醇溶液，充实混匀后加50mL75％氢氧化钾溶液，在蒸汽浴上边续回流30min后，立即冷却到室温。
2) 将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分屡次冲平底烧瓶。洗涤液并入分液漏斗中。
3) 于上述分液漏斗中，插手100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并强烈振摇1 min.在振摇进程中，留意开释瓶内压力。静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中，一再上棕萃取进程2次，归并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性，通过无水**钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近于(毫不应承蒸干)后，用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容。
4) 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中，用氮气将石油醚吹干，于试管中加1mL正己烷。
5.3测定：
1) 测定液的制备：
A) 仪器前提：
色谱柱：30cm×40cm，硅胶柱。
活动相：正己烷与环己烷按体积比1：1殽杂，并按体积分数0.8％插手异丙醇。
流速：1mL/min。
波长：265nm。
柱温：20℃。
迅速度：0.005AU/MV。
打针体积：200mL。
B) 打针50mL维生素D标样和200mL样品溶液，按照维生素D标样保存时刻网络维生素D于试管中，将试管用氮气吹干，精确插手0.2mL甲醇消融。
2) 测定步调：
A) 仪器前提：
色谱柱：4.6mm×25cm，C18或具平等机能的色谱柱。
活动相：甲醇。
流速：1mL/min。
波长：265nm。
柱温：20℃。
迅速度：0.005AU/MV。
打针体积：50mL。
B) 打针50mL维生素D尺度溶液，打针50mL样品溶液，获得标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。
6. 计较
ρs×10∕7×40×100
X =
m
As
ρs= ---×ρsd
Asd式中： X--样品维生素D的量，mg/100g；
m--称样量，含量，IU∕100g；
ρs --进样液中维生素D有浓度，mg/mL；
A s --进样液中维生素D有峰高(或峰面积)；
A s d --标样液中维生素D有峰高(或峰面积)；
ρsd --标样中维生素D的浓度；
计较功效准扰帕小数点后一位。
7. 留意事项
1) 应承偏差及最小检出量：统一样品的2次测定值之差不得高出2次测定均匀值的10％；最小检出量为0.1国标单元。
2) 试剂焦性没食子酸轻易变性，应购*近期出产的试剂。
3) 假如皂化不完全，可恰当增进氢氧化钾的插手量。