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食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定

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食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定高效液相色谱法

1.食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定 道理
样品中脂溶性维生素在皂化进程中与脂肪疏散,以石油醚萃取后,用正相色谱柱提取富集,用反相色谱柱,紫外检测器定量测定。
2. 食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定合用范畴
本要领来历于GB/T 5413.9-1997。合用于婴幼儿配方食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定;也合用于食物或强经食物及饲料中的维生素D含量的测定。
3. 食物和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定首要仪器
1) 高压液相色谱仪,具有可变波长的紫外检测器,数据处理赏罚体系或记录仪。
2) 旋转蒸发器。
3) 平底烧瓶:250mL。
4) 分液漏斗:500mL。
4. 试剂
全部试剂,如未注明规格,均指说明纯,所尝试用水均指蒸馏水。
1) 异丙醇:色谱纯。
2) 2%焦性没食子酸乙醇溶液:取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。
3) 75%氢氧化钾溶液:取75g氢氧化钾溶于100mL水中。
4) 石油醚:沸程30~60℃。
5) 甲醇:色谱纯。
6) 正己烷:色谱纯。
7) 环己烷:色谱醇。
8) 维生素D尺度溶液
A. 维生素D2尺度贮备液:含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2,用甲醇定容于100mL容量瓶中。
B. 维生素D3的尺度贮备液:含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3,用甲醇定容于100mL容量瓶中。
5. 操纵步调
5.1样品处理赏罚:精确称取10g样品,于250mL平底烧瓶中,加30mL蒸馏水。
5.2测定液的制备:
1) 于上述样品溶液中插手100mL的20%没食子酸乙醇溶液,充实混匀后加50mL75%氢氧化钾溶液,在蒸汽浴上边续回流30min后,立即冷却到室温。
2) 将皂化液转入一500mL分液漏斗中,用100mL水分屡次冲平底烧瓶。洗涤液并入分液漏斗中。
3) 于上述分液漏斗中,插手100mL石油醚,盖好瓶塞,倒置分液漏斗并强烈振摇1 min.在振摇进程中,留意开释瓶内压力。静置分层,将水相放入另一500mL分液漏斗中,一再上棕萃取进程2次,归并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性,通过无水硫酸钠过滤干燥,在40℃和氮气流下,于旋转蒸发器上蒸至近于(毫不应承蒸干)后,用石油醚转移至10mL容量瓶中,定容。
4) 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中,用氮气将石油醚吹干,于试管中加1mL正己烷。
5.3测定:
1) 测定液的制备:
A) 仪器前提:
色谱柱:30cm×40cm,硅胶柱。
活动相:正己烷与环己烷按体积比1:1殽杂,并按体积分数0.8%插手异丙醇。
流速:1mL/min。
波长:265nm。
柱温:20℃。
迅速度:0.005AU/MV。
打针体积:200mL。
B) 打针50mL维生素D标样和200mL样品溶液,按照维生素D标样保存时刻网络维生素D于试管中,将试管用氮气吹干,精确插手0.2mL甲醇消融。
2) 测定步调:
A) 仪器前提:
色谱柱:4.6mm×25cm,C18或具平等机能的色谱柱。
活动相:甲醇。
流速:1mL/min。
波长:265nm。
柱温:20℃。
迅速度:0.005AU/MV。
打针体积:50mL。
B) 打针50mL维生素D尺度溶液,打针50mL样品溶液,获得标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。
6. 计较
ρs×10∕7×40×100
X =
m
As
ρs= ---×ρsd
Asd式中: X--样品维生素D的量,mg/100g;
m--称样量,含量,IU∕100g;
ρs --进样液中维生素D有浓度,mg/mL;
A s --进样液中维生素D有峰高(或峰面积);
A s d --标样液中维生素D有峰高(或峰面积);
ρsd --标样中维生素D的浓度;
计较功效准扰帕小数点后一位。
7. 留意事项
1) 应承偏差及最小检出量:统一样品的2次测定值之差不得高出2次测定均匀值的10%;最小检出量为0.1国标单元。
2) 试剂焦性没食子酸轻易变性,应购习近期出产的试剂。
3) 假如皂化不完全,可恰当增进氢氧化钾的插手量。


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年02月25日