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肉及肉成品中新霉素残留检讨的高效液相色谱测定要领

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   (1)试剂和原料除非凡划定外,所用试剂均为说明纯
  
  ①乙腈
  
  ②甲醇:紫外光谱纯
  
  ③三乙胺
  
  ④磷酸(85%)
  
  ⑤氯化钠
  
  ⑥磷酸盐缓冲液
  
  ⑦殽杂提取液:磷酸盐缓冲液—乙腈(1 )。
  
  ⑧硼酸钾缓冲液:将2.5z硼酸溶于80mi水中,用50g/100ml氢氧化钾溶液调pH至lO.5,用水定容至100ml。
  
  ⑨邻苯二甲醛试剂:将100mg邻苯二甲醛溶于Iml甲醇中,插手200ul2—琉基乙醇和10ml硼酸钾缓冲液,用棕色瓶(有盖)贮存于冰箱中,1周内有用。
  
  ⑩碱性缓冲液:将76e四硼酸钾溶于400mi水中,用50g/100ml氢氧化钾溶液调pH至11.0,用水定容至500mi。
  
  ⑾洗脱剂:碱性缓冲液—甲醇(1十4)。
  
  ⑿阳离子互换树脂;D152。
  
  ⒀硫酸新霉素尺度品:生化试剂
  
  ⒁硫酸新霉素尺度溶液:称取适量的硫酸新霉素尺度品(准确至0,lmg),用水配成浓度为o.100rug/ml的尺度贮备溶液,按照必要再用水配成恰当浓度的尺度事变溶液。
  
  ⒂新霉素衍生物尺度溶液:将适量的尺度事变溶液注入到阳离子互换柱中,举办衍生化回响,制成新霉素衍生物尺度溶液,
  
  (2)仪器和装备
  
  ①液相色谱仪:配有荧光检测器
  
  ②高速组织捣碎机
  
  ③振荡器
  
  ④离心机
  
  ⑤过滤漏斗;滤孔为80-120um、40—80/um
  
  ⑥阳离子互换柱:120mmX5mm(内径)玻璃柱。用碱性缓冲液将阳离子互换树脂制成悬浮液,均衡2h,装入玻璃柱中,高度约为6cra,用5ml洗脱剂淋洗,流速为0.8ml/min,然后用水洗至流出液呈中性,备用。
  
  (3)测定步调
  
  ①提取称取试样约l0g(精确至0.1g)于一lOOml锥形瓶中,加人60ral殽杂提取液和2g氯化钠,振荡30min,经滤孔为80—120~m的过滤漏斗抽滤,残渣用3x10ml殽杂提取液洗涤。归并滤液和洗液于一250rnl烧杯中。在滚水中加热30min,取下,于3000r/min离心20min,置4℃冰箱中冷却20min,然后经滤孔为40~80bm的过滤漏斗抽滤,网络滤液。
  
  ②衍生化将滤液注入阳离子互换柱中,用lOml水洗柱,弃去流出液。将lml邻苯二甲醛试剂注入柱中,回响5rain。然后加2ml洗脱剂洗脱柱上衍生物。弃去前面iml洗脱液,网络后头lml洗脱液,当即安排在一18~0冰箱中,15min后举办液相色谱测定。
  
  ③测定
  
  a.色谱前提
  
  色谱柱:ODSHypersi
  
  柱温:35~C:
  
  活动相:77.5%甲醇水溶液中含0.09mol/L三乙胺和o.45moI/L磷酸
  
  流速:1.0ml/Illin
  
  引发波长:345nm
  
  发射波长:445nm
  
  进样量:10ul
  
  b.测定按照样液中新霉素含量环境,选定峰面积临近的新霉素衍生物尺度溶液。尺度液和样液中新霉素衍生物相应值均应在仪器检测线性范畴内。对尺度液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱前提下,新霉素衍生物的保存时刻约为6min。
  
  ④空缺试验除不加试样外,按上述测定步调举办。
  
  (4)检测限和接纳率
  
  本要领的测定低限为50ug/kg。
  
  在0.05-0.50mg/kg添加浓度程度上的接纳率范畴为90.4%-96.3%


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年02月12日