肉和肉成品中的乳糖的说明要领--Benedict溶液法

 

  Benedict溶液法     
A 试剂
    
A.a 驯化的酵母混悬液〔麦芽糖存在与否均合用〕
    取面包酵母饼2块〔每块17g〕浸泡后用H2O洗涤3次,每次50ml,每次洗涤后均离心。制备含下列因素的作育基:无水MgSO4 1.0g,无水K2HPO4 1.0g,KCl 0.5g,FeSO4·7H2O 0.02g,卵白胨0.7g,家产用麦芽糖20.0g。将上述各类因素依次用小量H2O消融,逐一插手有H2O 500ml的烧杯中,最后稀释至1L。加热过滤,滤液加热至沸,冷却至室温。将洗过的酵母插手1L作育基中,在30℃作育24h,前几小时要常常搅拌。用倾倒和离心法疏散酵母,用H2O洗涤2次,插手1L奇怪作育基中,再作育24h,前几小时也要搅拌。疏散酵母,用H2O洗涤不少于4次,稀释至100ml并冷藏。酵母可存活2-3周〔冷冻后存活时刻更长〕。
A.b 洗过的酵母混悬液〔麦芽糖不存在时行使〕
    取面包酵母饼2块,用约150ml H2O调成匀称的混悬液,离心5min,弃去水层。一再加H2O混归并离心4次,或至水层澄清为止,再将酵母悬浮于H2O中,并用H2O稀释至100ml,在4℃的冰箱中生涯。行使前充拭魅振摇,2周后弃去。
A.c Benedict溶液
    取CuSO4·5H2O 16g溶于125-150ml H2O。另取柠檬酸钠的二水合物150g,无水Na2CO3 130g及NaHCO3 10g,溶于约650ml热H2O中。二液归并后冷却,稀释至1L并过滤。
A.d 乳糖尺度溶液
    含无水乳糖1.5mg/ml。取乳糖水合物1.5789g加水消融并稀释至1L。
A.e 碘尺度溶液
    取I 5.08g及KI 10.2g溶于小量H2O中,过滤,稀释至1L。
A.f 硫代**钠尺度溶液
    取Na2S2O3·5H2O 9.92g,加H2O消融并稀释至1L。
A.g 稀醋酸
    取HOAc 240ml,加H2O稀释至1L。
A.h 稀磷酸
    取H3PO4 240ml,加H2O稀释至1L。
A.I 柠檬酸磷酸盐缓冲液
    pH4.8。取0.1M柠檬酸〔19.21g/L〕和0.2M Na2HPO4(28.4g无水/L),按10.14ml:9.86ml的比例殽杂,在pH计上调pH至4.8,置冰箱中生涯,如产生污浊即弃去。
A.j 淀粉溶液
    取可溶性淀粉2.5g和HgI2约10mg,用小量H2O调浆,然后溶于500ml沸H2O中。
B 测定〔有麦芽糖存在〕
    取样品10g置100ml糖容量瓶中,加小量H2O,振摇使样品分手。加H2O约50ml,在蒸汽浴上加热约30min,冷却至室温,加HCl 2ml,加H2O至刻度,以脂肪层的底线作为月牙形。加20%磷钨酸溶液5.0ml,混匀,静置数分钟,用润湿的滤纸过滤。取滤液40ml,置50ml容量瓶中,用氯酚红或其他指示剂调pH至4.8,加pH4.8的缓冲液5ml,稀释至刻度,摇匀。$$取酵母混悬液(a)5ml置离心管中,离心撤除H2O,插手上述样品溶液约40ml,摇匀后在30℃作育3h,并多次搅拌。离心后取上层清液测定还原糖:上清液10ml置300ml锥形瓶中,加Benedict溶液(c)20ml,在3-5min内加热至沸,并继承沸腾3min,准确计较时刻。取下冷却,渐渐加H2O 100ml和稀HOAc(g)10ml,边加边摇匀。加过量30%的碘尺度液(e)(1.5%乳糖约需15ml),振摇使Cu2O消融,安排5min以上,加稀H3PO4(h)20ml,用Na2S2O3液(f)滴定过量的I,以淀粉为指示剂。$$用乳糖尺度溶液10ml测定乳糖与I的比例,照上法至“加Benedict溶液20ml”起举办。$$用H2O 10ml测定碘与硫代**钠的比值,照上法自“加Benedict溶液20ml”起举办。$$ %乳糖=100KV/W $$ 式中K=每1ml碘溶液相等的乳糖克数;V=耗损碘液的体积;W=中分试样中样品的g数,以100ml作为最初的样品溶液的体积〔105ml减去肉所占的容积〕。
C 测定〔无麦芽糖存在〕
    取样品10g置100ml糖容量瓶中,加小量H2O,振摇使样品分手。加H2O约50ml,在蒸汽浴上加热约30min,冷却至室温,加HCl 2ml,加H2O至刻度,以脂肪层的底线作为月牙形。加20%磷钨酸溶液5.0ml,混匀,静置数分钟,用润湿的滤纸过滤。取滤液40ml,置50ml容量瓶中,用氯酚红或其他指示剂调pH至4.8,加pH4.8的缓冲液5ml,稀释至刻度,摇匀。$$取酵母混悬液(a)5ml置离心管中,离心撤除H2O,插手上述样品溶液约40ml,摇匀后在30℃作育3h,并多次搅拌。离心后取上层清液测定还原糖:上清液10ml置300ml锥形瓶中,加Benedict溶液(c)20ml,在3-5min内加热至沸,并继承沸腾3min,准确计较时刻。取下冷却,渐渐加H2O 100ml和稀HOAc(g)10ml,边加边摇匀。加过量30%的碘尺度液(e)(1.5%乳糖约需15ml),振摇使Cu2O消融,安排5min以上,加稀H3PO4(h)20ml,用Na2S2O3液(f)滴定过量的I,以淀粉为指示剂。$$用乳糖尺度溶液10ml测定乳糖与I的比例,照上法至“加Benedict溶液20ml”起举办。$$用H2O 10ml测定碘与硫代**钠的比值,照上法自“加Benedict溶液20ml”起举办。$$ %乳糖=100KV/W $$ 式中K=每1ml碘溶液相等的乳糖克数;V=耗损碘液的体积;W=中分试样中样品的g数,以100ml作为最初的样品溶液的体积〔105ml减去肉所占的容积〕。

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