肉类中三聚氰胺的检测方案

 

    酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。操作萃取液通过均质及振荡的方法提取样品中的三聚氰胺举办免疫测定。先将三聚氰胺酶标志物,样品萃取物及尺度插手到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始回响。在30分钟的孵育进程中,样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标志物竞争团结微孔中的三聚氰胺抗体,孵育30分钟后洗掉小孔中全部没有团结的三聚氰胺及三聚氰胺酶标志物。再用去离子水洗濯竣事后,每孔中插手清亮的底物溶液,团结的酶标志物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30分钟后遏制此回响,按照各孔颜色深浅举办数据读取。依据尺度的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值。

必要筹备的原料:

1、蒸馏水或去离子水
2、可汲取50ul和100ul的移液器及吸头
3、4000转离心机
4、吸水纸或相等的吸水原料
5、450nm的酶标仪
6、计时器
7、20mM PBS:需自行配制
8、洗濯液:需自行配制

试剂配制:
1、20mM PBS: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml
2、清 洗 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20

样品的前处理赏罚:    肉类(稀释倍数:5)

1、 称1g肉样,插手5ml的10%甲醇/20Mmpbs,震荡2min;
2、 4000转离心5min;
3、 取2ml 上清液插手2ml异辛烷:氯仿(2:3),混匀;
v4、 4000转离心5min,取上层150ul测定。[/b]
测定进程:

1、将全部试剂及样品回升至室温20-28℃,但不要安排高出24小时;
2、从铝箔袋中拿出要求数目的微孔条牢靠在微孔板架上,未行使的孔条与干燥剂一同放入密封袋中生涯;
3、汲取150ul尺度品、样品到对应微孔中,必需担保每种溶液行使干净的吸头汲取,停止交错污染。插手
50ul三聚氰胺酶标志物到每个小孔中;
4、轻轻摇板60秒,20-28摄氏度下孵育30分钟;
5、将微孔中的溶液倒入水槽中,用洗濯液完全布满微孔,震荡后倒掉,一再三次,总共四次洗板;
6、最后一次洗濯完后,倒掉孔中溶液,然后翻转微孔板在吸水纸上拍干;
7、每个微孔中插手100ul底物溶液;
8、20-28摄氏度下,孵育30分钟;
9、每个微孔中插手100ul遏制液;
10、450nm下读板。 

相关标准:GB 2730-2005 腌腊肉制品卫生标准

                   GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准

                   GB 2726-2005 熟肉制品卫生标准

                   GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法

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