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糖的消化和转运

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    目的原理 采用小肠段翻转肠囊法观察小肠对多糖的消化和对葡萄糖的转运,了解小肠的膜消化和主动转运葡萄糖所需的条件。离体肠袢在充分给氧并满足营养、温度的条件下,在一定时间内仍可保留机能活动。制备翻转肠囊置于含糖溶液中,一段时间后称量盲囊重量、囊内液体量及肠囊内外糖浓度的变化,从而可计算出糖的转运速度等。

    实验对象与用品 金仓鼠、豚鼠或家兔。恒温水浴锅、扭力天平、分光光度计、95%氧气和5%二氧化碳混合气体、烧杯、试管、注射器、D-葡萄糖、可溶性淀粉、碱性铜试剂、磷钼酸试剂、Krebs氏液等。

方法步骤

(一)翻转肠囊的制备 金仓鼠断颈处理,死后迅即开腹,摘出全段小肠,由断口注入温热生理盐水,充分洗净肠腔后放置于平皿中,再以充有混合气体的Krebs氏液清洗1~2次。然后用玻棒将肠管粘膜面向外翻转。将肠管切成等长(4cm)的若干段。先结扎肠段一端,由另一端注入Krebs氏液1mL后也将其结扎,封闭成双侧都为盲端的肠囊待用。

(二)培养准备工作 与此同时,取A、B两个50mL容量的烧杯,各加入20mLKrebs氏液,置于37℃水浴锅中,并通入混合气体,其流速约为1L/min,使气体在液体中呈连续小气泡不断地冒出。通气持续30min后杯口封盖。A杯加入1%淀粉溶液5mL,B杯加入0.05%葡萄糖溶液5mL。

(三)温育 取两只肠囊分别置于A和B杯中,在37℃水浴锅中温育1h,其间每隔10min摇晃一次烧杯。温育完毕取出肠囊进行如下测定。

(四)测定

1.肠囊内液体量的测定:用滤滤纸擦净肠囊外表面的液体,用扭力天平分别称取其各自重量;然后剪破肠囊一端,收集囊内液体分别盛于两支小试管中。将肠囊纵行切开成片状,用滤纸彻底吸净囊腔内附着的液体,再分别称取两肠囊重量。可求出两个肠囊所盛的液体量(通常要大于注入量百分之几至十)。

2.测定糖含量,采用福林-吴比色法,操作程序如下:

 

混合后立即用空白管液体调零点,用620nm波长比色。读取各管OD值,按标准管法计算糖浓度。

注意事项

1.加入磷钼酸后显色并不稳定,应迅速比色。

2.如果测定管OD值偏离标准管OD值太远,应改变葡萄糖标准溶液浓度(加大或减少)。

要求与思考题 根据实验结果讨论小肠对糖类的膜消化功能及对葡萄糖的吸收机理。

 

附注 本试验所用试剂配制方法如下:

1.碱性铜试剂:在400mL蒸馏水中加入无水碳酸钠40g,在300mL蒸馏水中加入酒石酸7.5g;在200mL蒸馏水中加入硫酸铜结晶4.5g。上述三种溶液分别加热溶解,冷却后将酒石酸溶液倾入碳酸溶液中,混合后加入硫酸铜溶液。最后以蒸馏水定容为1000mL。

2.磷钼酸试剂:钼酸70g、钨酸钠10g、10%NaOH溶液400mL及蒸馏水400mL,混合、加温并维持沸腾30min,以除去钼酸中可能含有的氨。冷却后加浓磷酸(85%)250mL,最后用蒸馏水定容为1000mL。

3.Krebs氏液:NaCl6.9g,KCl0.3g,CaCl20.28g,NaHCO32.1g,MgSO40.14g,KH2PO40.16g,加蒸馏水定容至100mL,配制时为避免发生白色沉淀,先将CaCl2置于500mL烧杯内,加蒸馏水300mL,将其他成分置于1L容量瓶内,加水500mL,再将经稀释溶解的CaCl2溶液边加边摇匀地加入容量瓶内,最后加水至1000mL刻度。


作者:admin 来源:网络收集 发布时间:2016年01月31日
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